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WB

发表时间:2019-11-26 10:54:57 关注:

一、概述

     Western Blot是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳分离开,再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体上,然后再加上抗体形成抗原抗体复合物,再利用发光或显色的原理将结果显示到膜或者底片上。

     SDS-PAGE电泳的高分辨率以及固相免疫测定的特异性和敏感性保证了最终实验结果的准确性。

WB是半定量实验,相比较于定性实验有数据分析,但是需要严格的参照标准,因此不是准确的数量关系,这也是与定量试验的不同之处。

二、技术流程

1.根据目标蛋白在细胞中的位置(细胞核中,细胞浆中,细胞膜上)和目标蛋白的性质(变性以及非变性)选择合适的提取蛋白的方法。

2.用合适的方法例如Bradford或者BCA法测定蛋白含量。

3.根据目标蛋白的大小制作合适浓度的SDS凝胶。

4.根据目标蛋白的大小选择合适的电泳电压以及电泳时间。

5.根据目标蛋白的大小以及剪切的凝胶的大小选择合适的转膜电流以及转膜时间。

6.根据目标蛋白的性质选择合适的封闭方法,例如脱脂奶粉,BSA等方法封闭。

7选择合适浓度的一抗进行孵育,洗膜

8选择合适浓度的二抗进行孵育,洗膜

9 ECL发光液进行曝光

三、客户须知

检测样本:新鲜的组织或者细胞,

样本量:检测细胞样本的一个指标的最低细胞含量是1*106,检测组织样本的一个指标的最低组织样品为30mg(建议多提供样本,便于研磨)

样本保存:

(1)新鲜的组织样本:迅速冻存。

(2)悬浮细胞:收集完以后,冷的PBS洗3遍,吸净残余的液体,冷冻保存。

(3)贴壁细胞:吸净培养基以后,预热的PBS洗3遍,胰酶收集,再用冷的PBS洗3遍,吸净残余液体,冷冻保存;对于不适合用胰酶收集的细胞(例如胰酶处理会消化掉一部分蛋白或者对于目标蛋白有刺激作用),预热的PBS洗3遍以后,用细胞刮收集细胞,吸净残余的液体,冷冻保存。

 4、请提前告诉我们:您样本的种属(人、大鼠、小鼠、兔、猪等)、样本数量、待测指标。

四、报告内容及标准

1  目的蛋白曝光照片一张

2  电子版目的蛋白和内参的照片

3  灰度分析数据一份

4  蛋白含量数据

5  完整的实验报告(试验方法,试验参数,实验仪器参数)

五、收费标准及服务周期

      收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变,详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。

六、质量保证

      良好的实验平台体系,先进的仪器设备以及从事WB实验多年的优质服务团队为您最终满意的实验结果保驾护航。

七、售后服务

      本公司会不定期进行顾客回访,以提高我们的服务质量。本条款以所签订的合作合同为依据,详情会因合同内容的不同而有所差异。


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