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RT-PCR

发表时间:2019-11-26 10:56:15 关注:

所谓实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

一、概述

实时荧光定量PCR于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学物质,随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前,实时荧光PCR技术已经被广泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域。

二、技术流程

引物设计合成

样品RNA的抽提及其质量检测

样品cDNA合成(逆转录反应)

梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因实时定量PCR

制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板

待测样品的待测基因实时定量PCR

三、客户须知

进行mRNA表达量分析时,请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA (浓度在500 ng/μl以上,体积在 20 μl以上)。如果目的基因表达量低时,应尽量提供更高浓度的Total RNA。应保证材料新鲜,动物细胞数为106以上,动物组织为100 mg以上。

提供靶基因信息,包括基因序列或GenBank Accession Number等。

提供详细背景资料,如生物物种信息(Human、Mouse、Rat等)、DNA/RNA来源、基因丰度等。

客户可以提供引物,没有引物的情况下,本公司帮助设计合成。

四、报告内容及标准

详细实验报告,包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。

五、收费标准及服务周期

收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变,详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。

六、质量保证

预实验检测引物与模板结合特异性,优化实验条件,并通过严格的QC保证结果的准确性。

七、售后服务

本公司会不定期进行顾客回访,以提高我们的服务质量。本条款以所签订的合作合同为依据,详情会因合同内容的不同而有所差异。


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